Sida 1

sida 2

s. 3

sida 4

s. 5

sida 6

sidan 7

sidan 8

sidan 9

sidan 10

sidan 11

s. 12

s. 13

s. 14

s. 15

sidan 16

s. 17

s. 18

s. 19

FEDERALBYRÅN FÖR TEKNISK REGLERING OCH METROLOGI

DEN NATIONELLA

STANDARD

RYSSKA

FEDERATIONER

MEDICINSKA PRODUKTER FÖR DIAGNOSTIK

I VITRO

Information från tillverkaren med in vitro -diagnostiska reagenser för biologisk färgning

In vitro -diagnostiska medicintekniska produkter - Information från tillverkaren med in vitro -diagnostiska reagenser för färgning i biologi (IDT)

Officiell utgåva

Standardinformation

Förord

Målen och principerna för standardisering i Ryska federationen är fastställda Federal lag av den 27 december 2002 nr 184-FZ "Om teknisk reglering" och reglerna för tillämpning av Ryska federationens nationella standarder-GOST R 1.0-2004 "Standardisering i Ryska federationen. Grundläggande bestämmelser "

Information om standarden

1 FÖRBEREDT av Laboratory of Problems of Clinical and Laboratory Diagnostics vid Research Institute of Public Health and Healthcare Management of the State Budgetary Educational Institution of Higher yrkesutbildning Första Moskva State Medical University. I. M. Sechenov "från Ryska federationens hälsoministerium på grundval av sin egen autentiska översättning till ryska internationell standard som anges i punkt 4

2 INTRODUCERAD av Tekniska kommittén för standardisering TC 380 "Klinisk laboratorieforskning och medicinsk utrustning för in vitro -diagnostik"

3 GODKÄND OCH INTRODUKERADE PÅ Order Federal agentur om teknisk reglering och metrologi daterad 25 oktober 2013 nr 1201-st.

4 Denna standard identisk med den internationella standarden ISO 19001: 2002 ”Medicinsk utrustning för in vitro -diagnostik. Information från tillverkaren med in vitro -diagnostiska reagenser för färgning i biologi ”(ISO 19001: 2002“ / l vitrodiagnostiska medicintekniska produkter - Information från tillverkaren med in vitro -diagnostiska reagenser för färgning i biologi ”).

Namnet på denna standard har ändrats från namnet på den angivna internationella standarden för att anpassa den till GOST R 1.5 (underavsnitt 3.5).

5 INTRODUKTION FÖR FÖRSTA GÅNGEN

Reglerna för tillämpning av denna standard fastställs i GOST R 1.0-2012 (avsnitt 8). Information om ändringar av denna standard publiceras i det årligen publicerade informationsindexet "National Standards", och texten till ändringar och ändringar - i de månatliga publicerade informationsindexen "National Standards". Vid revidering (ersättning) eller upphävande av denna standard kommer motsvarande meddelande att publiceras i det månatliga publicerade informationsindexet "Nationella standarder". Relevant information, meddelande och texter publiceras också i informationssystemet. allmänt bruk- på den officiella webbplatsen för Federal Agency for Technical Regulation and Metrology på Internet (gost.ru)

© Standartinform, 2014

Denna standard får inte reproduceras helt eller delvis, replikeras och distribueras som en officiell publikation utan tillstånd från Federal Agency for Technical Regulation and Metrology.

A.4.2.3.3 Färgningsprocedur

А.4.2.3.3.1 Avvaxa och rehydrera vävnadssektioner; utföra en antigenförändring (se ovanstående färgningsmetod)

A.4.2.3.3.2 Inkubera med väteperoxid. massfraktion 3% i destillerat vatten för 5

A.4.2.3.3.3 Skölj med destillerat vatten och lägg i TBS i 5 minuter.

A.4.2.3.3.4 Inkubera med monoklonal mus anti-human östrogenreceptor, optimalt utspädd i TBS (se A.4.2.3), i 20 till 30 minuter.

A.4.2.3.3.5 Tvätta med TBS och lägg i TBS -badet i 5 minuter.

A.4.2.3.3.6 Inkubera med arbetslösningen av biotinylerade getantikroppar mot immunoglobuliner från mus / kanin i 20 till 30 minuter.

A.4.2.3.3.7 Tvätta med TBS och lägg i TBS -badet i 5 minuter.

А.4.2.3.3.8 Inkubera med arbetslösningen av komplexet StreptAvidin -biotin / pepparrotperoxidas i 20 - 30 minuter.

A.4.2.3.3.9 Tvätta med TBS och lägg i TBS -badet i 5 minuter.

A.4.2.3.3.10 Inkubera med DAB-lösning i 5-15 minuter (använd handskar vid hantering av DAB).

A4.2.3.3.11 Skölj med destillerat vatten.

А.4.2.3.3.12 Utför motfärgning med hematoxylinlösning i 30 sekunder.

A.4.2.3.3.13 Skölj med kranvatten i 5 minuter.

A.4.2.3.3.14 Skölj med destillerat vatten i 5 minuter.

A.4.2.3.3.15 Dehydratisera med etanol 50% volym / volym i 3 minuter, sedan 3 minuter med 70% volym / volym och slutligen 3 minuter med 99% volym / volym.

A.4.2.3.3.16 Skölj i två xylenbyten, 5 min vardera. A.4.2.3.3.17 Extrahera till syntetiskt hydrofobt harts.

A.4.2.3.4 Föreslagna utspädningar

Optimal färgning kan erhållas genom att späda ut antikroppen i TBS vid pH = 7,6, blandad i volym från (1 + 50) till (1 + 75) μL när den undersöks på formalinfixerade paraffininbäddade mänskliga bröstcancersektioner. Antikroppen kan spädas ut med TBS, blandas i volymer från (1 + 50) till (1 + 100) μl, för användning i APAAP-teknik och avidin-biotinmetoder, i studien av acetonfixerade sektioner av fryst bröstcancervävnad.

A.4.2.3.5 Förväntade resultat

Antikroppen märker intensivt kärnorna i celler som är kända för att innehålla ett stort antal östrogenreceptorer, till exempel epitel- och myometrieceller i livmodern och normala och hyperplastiska epitelceller i bröstkörtlarna. Färgningen är övervägande lokaliserad i kärnorna utan färgning av cytoplasman. Kryostatsnitt som innehåller små eller odetekterbara mängder östrogenreceptorer (t.ex. tarmepitel, hjärtmuskelceller, hjärnceller och bindväv) är emellertid negativa med antikropp. Antikroppen märker bröstkarcinomepitelceller som uttrycker östrogenreceptorn.

Tygfärgning beror på hantering och bearbetning av tyget före färgning. Felaktig fixering, frysning, upptining, sköljning, torkning, uppvärmning, skärning eller kontaminering med andra vävnader eller vätskor kan orsaka artefakter eller falskt negativa resultat.

A.5 Demonstration av 7-celler genom flödescytometri

FÖRSIKTIGHET - Reagenset innehåller natriumazid (15 mmol / L). NaN 3 kan reagera med bly eller koppar för att bilda explosiva metallazider. Tvätta av med mycket vatten vid borttagning.

A.5.1 Monoklonala mus-anti-humana G-kuddar

Följande information gäller monoklonala mus mot 7 mänskliga husdjur:

a) produktidentitet: monoklonal mus anti-human 7-pet, CD3;

b) klon: UCHT;

c) immunogen: humana spädbarns tymocyter och lymfocyter från en patient med Sezary sjukdom;

d) antikroppskälla: renade monoklonala musantikroppar;

e) specificitet: antikroppen reagerar med T -celler i tymus, benmärg, perifer lymfoid vävnad och blod. De flesta tumör-T-celler uttrycker också CD3-antigenet, men det saknas i icke-T-celllymfoida tumörer. I överensstämmelse med modellen för antigensyntes i normala tymocyter är det tidigaste detekteringsstället i tumörceller cellens cytoplasma;

f) sammansättning:

0,05 mol / L Tris / HCl -buffert, 15 mmol / L NaN 3, pH = 7,2, bovint serumalbumin, massfraktion 1

Lg -isotyp: IgGI;

Rening av lg: Protein A Sepharose -kolonn;

Renhet: massfraktion cirka 95%;

Konjugatmolekyl: fluoresceinisotiocyanat isomer 1 (FITC);

- (NR) -relation: £ 495 nm / £ 278 nm = 1,0 ± 0,1 motsvarande ett molförhållande av FITC / protein på cirka 5;

e) hantering och lagring: stabil i tre år efter isolering vid en temperatur av 2 ° C till 8

A.5.2 Avsedd användning

A.5.2.1 Allmänt

Antikroppen är avsedd att användas i flödescytometri. Antikroppen kan användas för kvalitativ och kvantitativ detektion av T -celler.

A.5.2.2 Typ (ar) av material

Antikroppen kan appliceras på suspensioner av färska och fixerade celler, acetonfixerade kryostatsektioner och cellutstryk.

A.5.2.3 Testförfarande för antikroppsreaktivitet för flödescytometri

Detaljerna för det förfarande som tillverkaren använder är följande:

a) Samla venöst blod i ett provrör som innehåller ett antikoagulantia.

b) Isolera mononukleära celler genom centrifugering på ett separationsmedium; annars lyser erytrocyterna efter inkubationssteget som anges i d).

c) Tvätta mononukleära celler två gånger med RPMI 1640 eller fosfatbuffrad saltlösning (PBS) (0,1 mol / L fosfat, 0,15 mol / L NaCl, pH = 7,4).

d) Till 10 | il FITC-konjugerade monoklonala mus-anti-humana T-celler, CD3-reagens, tillsätt en cellsuspension innehållande 1-10 e-celler (vanligtvis cirka 100 ml) och blanda. Inkubera i mörker vid 4 ° C i 30 minuter [för dubbel färgning samtidigt måste R-phycoerythrin-konjugerad antikropp (RPE) tillsättas].

f) Tvättas två gånger med PBS + 2% bovint serumalbumin; återsuspendera cellerna i en lämplig vätska för analys på en flödescytometer.

f) Använd en annan monoklonal antikropp konjugerad med FITC (fluoresceinisotiocyanat) som negativ kontroll

e) De utfällda cellerna fixeras genom omrörning med 0,3 ml paraformaldehyd med en massfraktion av 1% i PBS. När de förvaras i mörker vid 4 ° C kan fasta celler förvaras i upp till två veckor.

h) Analysera på en flödescytometer.

A.5.2.4 Föreslagen utspädning

Antikroppen ska användas för flödescytometri i koncentrerad form (10 | il / gest). För användning på kryostatskivor och cellutstrykningar måste antikroppen blandas med ett lämpligt utspädningsmedel i ett volymförhållande på (1 + 50) µl.

A.5.2.5 Förväntade resultat

Antikroppen detekterar CD3-molekylen på ytan av T-cellerna. Vid utvärdering av färgning av kryostatsektioner och cellutstrykningar bör reaktionsprodukten lokaliseras på plasmamembranet.

Tygfärgning beror på hanteringen och bearbetningen av tyget före färgningen. Felaktig fixering, frysning, upptining, tvätt, torkning, uppvärmning, snittning eller kontaminering med andra vävnader eller vätskor kan orsaka artefakter eller falskt negativa resultat.

Bilaga JA (referens)

Information om överensstämmelse mellan de refererade internationella och europeiska regionala standarderna med Ryska federationens nationella standarder

Tabell JA.1

Beteckning på den refererade internationella standarden överensstämmelse Beteckning och titel på den relevanta nationella standarden * Det finns ingen motsvarande nationell standard. Innan det godkänns rekommenderas det att använda rysk översättning språket i denna internationella standard. Översättning av detta internationell standard finns i Federal Information Center for Technical Regulations and Standards.

NATIONELL STANDARD FÖR RYSSKA FEDERATIONEN

MEDICINSKA PRODUKTER FÖR IN VITRO DIAGNOSTIK Information från tillverkaren med in vitro -diagnostiska reagenser som används för färgning i biologi

In vitro -diagnostiska medicintekniska produkter. Information från tillverkaren med in vitro -diagnostiska reagenser för färgning i biologi

Introduktionsdatum-2014-08-01

1 användningsområde

Denna internationella standard specificerar krav för information från tillverkare om reagenser som används för färgning i biologi. Kraven gäller tillverkare, leverantörer och säljare av färgämnen, färger, kromogena reagenser och andra reagenser som används för färgning i biologi. Kraven på information från tillverkare som specificeras i denna standard är nödvändigt skick erhålla jämförbara och reproducerbara resultat inom alla områden av färgning inom biologi.

Denna standard använder normativa referenser till följande internationella och europeiska regionala standarder:

ISO 31-8, kvantiteter och enheter. Del 8. Fysisk kemi och molekylär fysik (ISO 31-8, kvantiteter och enheter - del 8: Fysisk kemi och molekylär fysik)

EH 375: 2001 Information från tillverkaren med in vitro -diagnostiska reagenser för yrkesmässigt bruk

EH 376: 2001 Information från tillverkaren med in vitro-diagnostiska reagenser för självtestning

Obs - När du använder denna standard är det lämpligt att kontrollera giltigheten av referensstandarderna i det offentliga informationssystemet - på den officiella webbplatsen för Federal Agency for Technical Regulation and Metrology på Internet eller enligt det årliga informationsindexet "National Standards ", som publicerades från och med den 1 januari innevarande år, och om frågorna om det månatliga informationsindexet" National Standards "för innevarande år. Om den refererade standarden till vilken en odaterad referens ges ersätts, rekommenderas att den nuvarande versionen av standarden används, med förbehåll för eventuella ändringar av den versionen. Om den refererade standarden som den daterade referensen ges till ersätts, rekommenderas det att använda versionen av standarden med ovanstående godkännandeår (godkännande). Om det efter godkännandet av denna standard görs en ändring av den refererade standard till vilken den daterade referensen ges, vilket påverkar bestämmelsen som referensen görs, rekommenderas att bestämmelsen tillämpas utan att ta hänsyn till den ändringen. Om referensstandarden avbryts utan att ersättas, rekommenderas att bestämmelsen i vilken referensen till den ges tillämpas i den del som inte påverkar denna referens.

3 Termer och definitioner

Följande termer används i denna standard med motsvarande definitioner:

3.1 information från tillverkaren all tryckt, skriven, grafisk eller annan information som levereras med eller åtföljer ett IVD -reagens

3.2 etiketter: all tryckt, skriven eller grafisk information på ett paket

Officiell utgåva

3.3 in vitro -diagnostiskt reagensreagens som används ensamt eller i kombination med andra in vitro -diagnostiska medicintekniska produkter avsedda av tillverkaren för in vitro -studier av ämnen av mänskligt, animaliskt eller vegetabiliskt ursprung för att få information om upptäckt, diagnos, övervakning eller behandling av fysiologiska tillstånd, hälsotillstånd eller sjukdom eller medfödd anomali.

3.4 färgning av färgning av ett material genom reaktion med ett färgämne eller kromogent reagens

3,5 färgad färgad organisk förening som, när den är upplöst i ett lämpligt lösningsmedel, kan ge färg till materialet

OBS Färgens fysiska karaktär är selektiv absorption (och / eller emission) i det synliga området i det elektromagnetiska spektrumet mellan 400 och 800 nm. Färgämnen är molekyler med stora system av delokaliserade elektroner (bundna TT-elektronsystem). Ljusabsorptionsegenskaperna hos färgämnen representeras av ett absorptionsspektrum i form av ett diagram som jämför ljusabsorption och våglängd. Spektrumet och våglängden vid maximal absorption beror på den kemiska strukturen hos färgämnet, lösningsmedlet och spektrala mätförhållanden.

3.6 färglösning av ett eller flera färgämnen vid angivna koncentrationer i ett specifikt lösningsmedel som används för färgning

OBS Färgen kan framställas genom att färgämnet direkt löses upp i ett lösningsmedel eller genom att späda ut den färdiga stamlösningen med lämpliga medel.

3.6.1 stamlösning av fläckstabil, definierad lösning av ett eller flera färgämnen vid en högre koncentration än den som används för färgning

OBS! Stabilitet innebär konsistensen hos egenskaperna hos ett färgämne även i närvaro av andra färgämnen.

3.7 kromogent reagensreagens som reagerar med kemiska grupper som finns eller framkallas i celler och vävnader för att bilda en färgad förening in situ

EXEMPEL Typiska kromogena reagenser:

a) diazoniumsalt;

b) Schiffs reagens.

3.8 fluorokromereagens som avger synligt ljus vid bestrålning med excitationsljus med kortare våglängd

3.9 antikroppsspecifikt immunglobulin producerat av B-lymfocyter som svar på exponering för en immunogen substans och som kan binda till det

Obs - En molekyl av en immunogen substans innehåller en eller flera delar med en karakteristisk kemisk sammansättning, en epitop.

3.9.1 polyklonal antikroppsblandning av antikroppar som kan reagera specifikt med en specifik immunogen substans

3.9.2 monoklonal antikropp Antikropp som kan reagera specifikt med en enda epitop av en specifik immunogen substans

3.10 nukleinsyrasond Enkelsträngad oligonukleotid eller polynukleotid av en specifik längd, komplementär till en specifik nukleotidsekvens av nukleinsyror

3.11 lektin: Ett icke-immunogent protein med två eller flera bindningsställen som känner igen och binder till specifika sackaridrester.

4 Krav på information från tillverkaren

4.1 Allmänna krav

4.1.1 Information från tillverkaren med reagenser som används för färgning i biologi

Informationen från tillverkaren med reagenser som används för färgning i biologi bör överensstämma med ISO 31-8, ISO 1000, EN 375 och EN 376. Särskild uppmärksamhet bör ägnas åt varningarna i EN 375. Dessutom, om tillämpligt, dessutom , kraven i 4.1.2, 4.1.3 och 4.1.4 bör tillämpas på de olika reagens som används för färgning i biologi.

4.1.2 Produktnamn

Produktnamnet måste inkludera CAS -registreringsnummer och färgämnesnamn och indexnummer, om tillämpligt.

Anmärkning1- CAS-registreringsnummer är CAS-registreringsnummer. De representerar de numeriska kodnumren för de ämnen som tilldelats de kemiska ämnena, som fick indexet i Chemical Reference Service.

OBS 2 Bläckindexet ger ett 5-siffrigt nummer, C.I. och ett särskilt sammanställt namn för de flesta färgämnena.

4.1.3 Reagensbeskrivning

Reagensbeskrivningen bör innehålla relevanta fysikaliska och kemiska data, åtföljd av information som är specifik för varje sats. Uppgifterna måste innehålla åtminstone följande information:

a) molekylformel, inklusive motjon;

b) molmassa (g / mol) exakt angiven, med eller utan införande av en motjon;

c) acceptabla gränser för störande ämnen.

För färgade organiska föreningar bör uppgifterna innehålla:

d) molarabsorption (istället kan innehållet i molekylen i det rena färgämnet anges, men inte innehållet i det totala färgämnet);

e) våglängd eller antal vågor vid maximal absorption;

f) data från tunnskiktskromatografi, högpresterande vätskekromatografi eller högpresterande tunnskiktskromatografi.

4.1.4 Avsedd användning

En beskrivning bör tillhandahållas med vägledning om färgning i biologi och kvantitativa och kvalitativa förfaranden (om tillämpligt). Informationen bör innehålla detaljer om följande:

a) typ (er) av biologiskt material, hantering och behandling före färgning, till exempel:

1) om cell- eller vävnadsprover kan användas;

2) om fryst eller kemiskt fixerat material kan användas;

3) protokoll för vävnadshantering;

4) vilken typ av fixeringsmedium som kan appliceras;

b) detaljer om det lämpliga reaktionsförfarandet som används av tillverkaren för att undersöka reaktiviteten hos ett färgämne, färgämne, kromogent reagens, fluorokrom, antikropp, nukleinsyrasond eller lektin som används för färgning i biologi;

c) de resultat som förväntas av svarsförfarandet på den eller de avsedda materialtyperna på det sätt som anges av tillverkaren.

d) anmärkningar om lämpliga positiva eller negativa vävnadskontroller och tolkning av resultaten.

4.2 Ytterligare krav för specifika typer av reagenser

4.2.1 Fluorokromer

Oavsett typ av ansökan måste fluorokromer som föreslås för färgning i biologi åtföljas av följande information:

a) selektivitet, såsom att beskriva målet / målen som kan demonstreras med hjälp av specifika förhållanden; våglängder för excitation och utsläppsljus; för fluorokromer associerade med antikroppar, förhållandet fluorokrom / protein (F / B).

4.2.2 Metallsalter

Om metallinnehållande föreningar föreslås för användning i metallabsorberande tekniker för färgning i biologi, bör följande ytterligare information tillhandahållas:

systematiskt namn; renhet (inga föroreningar).

4.2.3 Antikroppar

Antikroppar som föreslås för färgning i biologi måste åtföljas av följande information:

a) en beskrivning av antigenet (immunogen substans) mot vilken antikroppen riktas och, om antigenet bestäms av klusteret i differentieringssystemet, CD -numret. Beskrivningen bör, om så är lämpligt, innehålla den typ av makromolekyl som detekteras, en del som återfinns, den cellulära lokaliseringen och cellerna eller vävnaderna i vilka den finns, och eventuell korsreaktivitet med andra epitoper;

b) för monoklonala antikroppar, klon, bildningsmetod (vävnadskultursupernatant eller askitvätska), immunglobulinsubklass och lättkedjans identitet;

c) för polyklonala antikroppar, värddjuret, och om hela serum eller en immunglobulinfraktion används;

en beskrivning av formen (lösning eller frystorkat pulver), mängden totalt protein och specifik antikropp och för lösningen - lösningsmedlets eller mediumets art och koncentration;

e) om tillämpligt, en beskrivning av eventuella molekylära bindemedel eller hjälpämnen som tillsätts till antikroppen;

ett uttalande om renhet, reningsteknik och detekteringsmetoder för föroreningar (t.ex. Western blotting, immunhistokemi);

4.2.4 Nukleinsyrasonder

Nukleinsyrasonder som föreslås för biologisk färgning måste åtföljas av följande information:

sekvensen av baser och är sonden en - eller två -spiralformad; sondens molmassa eller antalet baser och, om tillämpligt, antalet fraktioner (i procent) av guanin-cytosinbaspar;

använd markör (radioaktiv isotop eller icke-radioaktiv molekyl), fästpunkten till sonden (3 "och / eller 5") och andelen av ämnet i procent av den märkta sonden; detekterbart genmål (DNA- eller RNA -sekvens);

e) en beskrivning av formen (frystorkat pulver eller lösning) och mängden (pg eller pmol) eller koncentration (pg / ml eller pmol / ml), om tillämpligt, och, i fallet med en lösning, arten och koncentrationen av lösningsmedlet eller mediet;

f) en renhetsförklaring, reningsförfaranden och detektionsmetoder för föroreningar, t.ex. högpresterande vätskekromatografi;

Bilaga A (informativ)

Exempel på information från tillverkaren med vanliga reagenser

i biologiska färgningstekniker

A.1 Allmänt

Följande information ger exempel på procedurer och ska inte tolkas som det enda sättet ett förfarande bör utföras. Dessa procedurer kan användas av tillverkaren för att undersöka färgämnens reaktivitet och illustrera hur tillverkaren kan tillhandahålla information för att följa denna internationella standard.

A.2 Metylgrönt färgämne-pyronin Y A.2.1 Metylgrönt färgämne

Informationen om färgämnet metylgrön är följande:

a) produktidentitet:

Metylgrön (synonymer: SF dubbelgrön, ljusgrön);

CAS-registreringsnummer: 22383-16-0;

Färgnamn och indexnummer: grundläggande blå 20, 42585;

b) sammansättning:

Molekylformel inklusive motjon: C2 bNZM 3 2 + 2BF4 ";

Molmassa med (eller utan) motjon: 561,17 g mol "1 (387,56 g

Massfraktion (innehåll) av metylgrön katjon: 85%, bestämd med hjälp av absorptionsspektrometri;

Tillåtna gränser för störande ämnen, angivna som massfraktioner:

1) vatten: mindre än 1%;

2) oorganiska salter: mindre än 0,1%;

3) tvättmedel: finns inte;

4) färgade föroreningar, inklusive violetta kristaller: kan inte detekteras med tunnskiktskromatografi;

5) likgiltiga föreningar: 14% löslig stärkelse;

d) tunnskiktskromatografi: endast en huvudkomponent är närvarande, motsvarande

metylgrön;

e) Hantering och lagring: Stabil vid förvaring i en noggrant förseglad brun flaska vid rumstemperatur (18 ° C till 28 ° C).

A.2.2 Färgämne etylgrönt

Informationen relaterad till färgämnet etylgrön är följande:

a) produktidentitet:

1) etylgrön (synonym: metylgrön);

2) CAS-registreringsnummer: 7114-03-6;

3) färgindexets namn och nummer: namnet finns inte i färgindexet, 42590;

b) sammansättning:

1) molekylformel inklusive motjon: C27H 3 5N 3 2+ 2 BF4 ";

2) molmassa med (eller utan) motjon: 575,19 g mol "1 (401,58 g mol" 1);

3) massfraktion av etylgrön katjon: 85%, bestämt med absorptionsspektrometri;

Vatten: mindre än 1%;

Tvättmedel: frånvarande;

c) våglängd för maximal absorption av färglösningen: 633 nm;

d) tunnskiktskromatografi: det finns bara en huvudkomponent, som sammanfaller med etylgrön;

A.2.3 Färgsubstans pyronin Y

Följande information gäller för färgämnet pyronin Y:

a) produktidentitet:

1) pyronin Y (synonymer: pyronin Y, pyronin G, pyronin G);

2) CAS-registreringsnummer: 92-32-0;

3) namn och nummer i bläckindexet: det finns inget namn i bläckindexet, 45005;

b) sammansättning:

1) molekylformel inklusive motjon: Ci7HigN20 + SG;

2) molmassa med (eller utan) motjon: 302,75 g mol "1 (267,30 g mol" 1);

3) massfraktion av pyronin Y -katjon: 80%, bestämt med absorptionsspektrometri;

4) tillåtna gränser för störande ämnen, angivna som massfraktioner:

Vatten: mindre än 1%;

Oorganiska salter: mindre än 0,1%;

Tvättmedel: frånvarande;

Färgade föroreningar inklusive violetta kristaller: kan inte detekteras med tunnskiktskromatografi;

Olikartade föreningar: 19% löslig stärkelse;

c) våglängd för maximal absorption av färglösningen: 550 nm;

d) tunnskiktskromatografi: det finns bara en huvudkomponent, som sammanfaller med pyronin Y;

e) Hantering och lagring: Stabil vid förvaring i en noggrant sluten brun glasflaska vid rumstemperatur mellan 18 ° C och 28 ° C.

A.2.4 Avsedd användning av metylgrön-pyronin Y-färgningsmetoden

A.2.4.1 Typ (ar) av material

Metylgrön-pyronin Y-färgämne används för att färga färska frusna, vaxade eller plastpapper olika typer.

A.2.4.2 Hantering och hantering före färgning Möjliga fixeringsmedel inkluderar:

Carnoyvätska [etanol (volymfraktion 99%) + kloroform + ättiksyra (massfraktion 99%), blandad i volymer (60 + 30 + 10) ml] eller

Formaldehyd (massfraktion 3,6%), fosfatbuffrad (pH = 7,0); rutinmässig torkning, rengöring, blötläggning och paraffinbeläggning; rutinmässig förberedelse av sektioner med hjälp av en mikrotom.

A.2.4.3 Arbetslösning

En lösning av etylgrön eller metylgrön framställs från en mängd som motsvarar vikten av 0,15 g rent färgämne, beräknat som en färgad katjon (i exemplen ovan, 0,176 g i varje fall) i 90 ml varmt (temperatur 50 ° C) destillerat vatten.

Lös den mängd som motsvarar vikten av 0,03 g pyronin Y, beräknad som en färgad katjon (i exemplet ovan 0,038 g) i 10 ml 0,1 mol / l ftalatbuffert (pH = 4,0). Den senare lösningen blandas med en lösning av etylgrön eller metylgrön.

A.2.4.4 Stabilitet

Arbetslösningen är stabil i minst en vecka när den förvaras i en tätt sluten brun glasflaska vid rumstemperatur mellan 18 ° C och 28 ° C.

A.2.4.5 Färgningsprocedur A.2.4.5.1 Avvaxa sektionerna.

A.2.4.5.2 Fukta sektionerna.

A.2.4.5.3 Färgsektioner i 5 minuter vid rumstemperatur ca 22 ° C i en bearbetning

lösning.

А.2.4.5.4 Tvätta sektionerna i två byten destillerat vatten, från 2 till 3 sekunder vardera.

A.2.4.5.5 Skaka av överflödigt vatten.

A.2.4.5.6 Aktivera i tre byten av 1-butanol.

A.2.4.5.7 Överför direkt från 1-butanol till det hydrofoba syntetiska hartset.

A.2.4.6 Förväntat resultat

Följande resultat förväntas med de materialtyper som anges i A.2.4.1:

a) för kärnkromatin: grönt (Karnovs fixativ) eller blått (formaldehydfixativ); a) för nukleoli och cytoplasma rik på ribosomer: röd (Karnovs fixativ) eller lila-röd (formaldehydfixativ);

c) för broskmatris och mastcellskorn: orange;

d) för muskler, kollagen och erytrocyter: inte färgade.

A.3 Felgen-Schiff-reaktion

A.3.1 Färgämne pararosanilin

FÖRSIKTIGHET - För R 40: möjlig risk irreversibla effekter.

För S 36/37: Skyddskläder och handskar krävs.

Följande information gäller färgämnet pararosanilin.

a) produktidentitet:

1) pararosanilin (synonymer: grundläggande rubin, parafuchsin, paramagenta, magenta 0);

2) CAS-registreringsnummer: 569-61-9;

3) namn och indexantal färger: grundläggande röd 9, 42500;

b) sammansättning:

1) molekylformeln, inklusive motjonen: Ci9Hi8N3 + SG;

2) molmassa med (och utan) tiojonen: 323,73 g mol "1 (288,28 g mol" 1);

3) massfraktion av pararosanilinkatjon: 85%, bestämt med absorptionsspektrometri;

4) tillåtna gränser för störande ämnen, angivna som massfraktioner:

Vatten: mindre än 1%;

Oorganiska salter: mindre än 0,1%;

Tvättmedel: finns inte;

Färgade föroreningar: metylerade pararosanilinhomologer kan förekomma i spårmängder som bestäms genom tunnskiktskromatografi, men akridin saknas;

Olikartade föreningar: 14% löslig stärkelse;

c) våglängd för maximal absorption av färglösningen: 542 nm;

d) tunnskiktskromatografi: en huvudkomponent är närvarande, motsvarande

pararosanilin; metylerade homologer av pararosanilin i spårmängder;

e) Hantering och lagring: Stabil vid förvaring i en noggrant förseglad brun flaska vid rumstemperatur mellan 18 ° C och 28 ° C.

A.3.2 Avsedd användning av Felgen-Schiff-reaktionen

A.3.2.1 Typ (ar) av material

Felgen-Schiff-reaktionen används för vaxade eller plastiska sektioner av olika typer av vävnader eller cytologiskt material (utstryk, vävnadstryck, cellodling, monoskikt):

A.3.2.2 Hantering och hantering före färgning

A.3.2.2.1 Möjliga fixeringsmedel

Möjliga fixeringsmedel inkluderar:

a) histologi: formaldehyd (massfraktion 3,6%), fosfatbuffrad, (pH = 7,0);

b) cytologi:

1) flytande fixeringsmaterial: etanol (volymfraktion 96%);

2) lufttorkat material:

Formaldehyd (massfraktion 3,6%), fosfatbuffrad;

Metanol + formaldehyd (massfraktion 37%) + ättiksyra (massfraktion 100%), blandat i volymer (85 + 10 + 5) ml.

Materialet fixerat i Buins fixeringsmedel är olämpligt för denna reaktion.

Detaljer om metoden som tillverkaren använde för att studera reaktiviteten hos det kromogena reagenset ges i A.3.2.2.2-A.3.2.4.

A.3.2.2.2 Pararosanilin-Schiff-reagens

Lös upp 0,5 g pararosanilinklorid i 15 ml 1 mol / l saltsyra. Tillsätt 85 ml av en vattenlösning av K2S2 0 5 (massfraktion 0,5%). Vänta 24 timmar. Skaka 100 ml av denna lösning med 0,3 g kol i 2 minuter och filtrera. Förvara den färglösa vätskan vid en temperatur som inte är lägre än 5 ° C. Lösningen är stabil i minst 12 månader i en tätt sluten behållare.

A.3.2.2.3 Tvättlösning

Lös upp 0,5 g K2S 2 O i 85 ml destillerat vatten. Tillsätt 15 ml 1 mol / l saltsyra. Lösningen är klar för omedelbar användning och kan användas inom 12 timmar.

A.3.2.3 Färgningsprocedur

A.3.2.3.1 Avvaxa de vaxade sektionerna i xylen i 5 minuter, skölj sedan i 2 minuter, först i etanol med en volymfraktion på 99% och sedan i etanol med en volymandel på 50%.

A3.2.3.2 Blötlägg plastsektioner, avvaxade vaxavsnitt och cytologiskt material i destillerat vatten i 2 minuter.

A.3.2.3.3 Hydrolysera materialet i 5 mol / L saltsyra vid 22 ° C i 30 till 60 minuter (den exakta hydrolystiden beror på materialtypen).

A.3.2.3.4 Skölj med destillerat vatten i 2 minuter.

A3.2.3.5 Fläck med pararosanilinreagens i 1 timme.

A3.2.3.6 Tvätta i tre på varandra följande byten av tvättlösningen, 5 min vardera.

A.3.2.3.7 Tvätta två gånger med destillerat vatten, 5 minuter varje gång.

A.3.2.3.8 Dehydratisera i 50% volym / volym etanol, sedan 70% och slutligen 99% etanol i 3 minuter varje gång.

A.3.2.3.9 Tvätta två gånger i xylen i 5 minuter varje gång.

A.3.2.3.10 Extrahera till syntetiskt hydrofobt harts.

A.3.2.4 Förväntade resultat

Följande resultat förväntas med de materialtyper som anges i A.3.2.1:

För cellkärnor (DNA): röd.

A.4 Immunokemisk demonstration av östrogenreceptorer

FÖRSIKTIGHET - Reagens som innehåller natriumazid (15 mmol / L). NaN 3 kan reagera med bly eller koppar för att bilda explosiva metallazider. Tvätta av med mycket vatten vid borttagning.

A.4.1 Monoklonal murin anti-human östrogenreceptor

Följande information avser den monoklonala murina anti-humana östrogenreceptorn.

a) produktidentitet: monoklonal mus anti-human östrogenreceptor, klon 1D5;

b) klon: 1D5;

c) immunogen: rekombinant humant östrogenreceptorprotein;

d) antikroppskälla: monoklonal musantikropp levererad i flytande form som vävnadskultursupernatant;

e) specificitet: antikroppen reagerar med L / -terminaldomänen (A / B -regionen) hos receptorn. När den immunoblottas reagerar den med en 67 kDa polypeptidkedja erhållen genom transformation av Escherichia coli och transfektion av COS -celler med plasmidvektorer som uttrycker östrogenreceptorn. Dessutom reagerar antikroppen med cytosoliska extrakt av luteal endometrium och humana bröstcancer MCF-7-celler;

f) korsreaktivitet: antikroppen reagerar med råttens östrogenreceptorer;

e) sammansättning: vävnadskultursupernatant (RPMI 1640 -medium innehållande fetalt kalvserum), dialyserad mot 0,05 mmol / L Tris / HCI, pH = 7,2, innehållande 15 mmol / L nr N3.

Ig -koncentration: 245 mg / l;

Ig -isotyp: IgGI;

Lätt kedja identitet: kappa;

Total proteinkoncentration: 14,9 g / l;

h) Hantering och lagring: Stabil upp till tre år vid förvaring vid 2 ° C till 8 ° C.

A.4.2 Avsedd användning

A.4.2.1 Allmänt

Antikroppen används för kvalitativ och semi-kvantitativ detektion av östrogenreceptoruttryck (t.ex. bröstcancer).

A.4.2.2 Typ (ar) av material

Antikroppen kan appliceras på formalinfixerade vaxade sektioner, acetonfixerade frysta sektioner och cellutstryk. Dessutom kan antikroppen användas för att detektera antikroppar genom en enzymkopplad immunosorbentanalys (ELISA).

A.4.2.3 Färgningsprocedur för immunhistokemi

A.4.2.3.1 Allmänt

För paraffinerade formalinfixerade vävnadssektioner används en mängd känsliga färgningsteknologier, inklusive immunoperoxidas, APAAP (alkaliskt fosfatas-anti-alkaliskt fosfatas) -teknologi och avidin-biotinmetoder, såsom LSAB-metoder (märkta StreptAvidin-Biotin). Antigenförändringar såsom uppvärmning i 10 mmol / L citratbuffrad saltlösning, pH = 6,0, krävs. Objektglas bör inte torka ut under denna behandling eller under nästa immunhistokemiska färgningsprocedur. APAAP -metoden föreslogs för färgning av cellutstryk.

Detaljer om proceduren som används av tillverkaren vid formalinfixerade vaxade vävnadssektioner för att studera antikroppsreaktivitet för immunhistokemi ges i A.4.2.3.2 -A.4.2.3.4.

A.4.2.3.2 Reagenser

А.4.2.3.2.1 Väteperoxid, massfraktion 3% i destillerat vatten.

A.4.2.3.2.2 Tris -buffertlösning (TBS), bestående av 0,05 mol / L Tris / HCl och 0,15 mol / L NaCl vid pH =

A.4.2.3.2.3 Primär antikropp, bestående av den monoklonala murina anti-humana östrogenreceptorn, optimalt utspädd i TBS (se A.4.2.3.4).

A.4.2.3.2.4 Biotinylerad get anti-mus / kanin immunoglobulin antikropp, fungerar

Förbered denna lösning minst 30 minuter, men inte tidigare än 12 timmar före användning, enligt följande:

5 ml TBS, pH = 7,6;

50 | il biotinylerade, affinitetsisolerade getimmus / kaninimmunoglobuliner i 0,01 mol / l fosfatbuffrad saltlösning, 15 mmol / l # N3, tillräcklig för att få slutkoncentrationen till 10-20 mg / ml.

A.4.2.3.2.5 StreptAvidin-biotin / pepparrotsperoxidaskomplex (StreptABComplex / HRP), arbetar

Förbered denna lösning enligt följande:

5 ml TBS, pH = 7,6;

50 | il StreptAvidin (1 mg / L) i 0,01 mol / L fosfatbuffertlösning, 15 mmol / L NaN3;

50 | il biotinylerad pepparrotsperoxidas (0,25 mg / l) i 0,01 mol / l fosfatbuffertlösning, 15 mmol / l NaN3;

A.4.2.3.2.6 Diaminebenzidinsubstratlösning (DAB)

Lös upp 6 mg 3,3 "-diaminbensidintetrahydroklorid i 10 ml 0,05 mol / l TBS, pH = 7,6. Tillsätt 0,1 ml väteperoxid 3 viktprocent i destillerat vatten. Om nederbörd inträffar, filtrera.

A.4.2.3.2.7 Hematoxylin

Lös upp 1 g hematoxylin, 50 g aluminiumkaliumsulfat, 0,1 g natriumjodat och 1,0 g citronsyra i 750 ml destillerat vatten. Späd till 1000 ml med destillerat vatten.

där koefficienten k karakteriserar fångsthastigheten och exponenten m är reaktionens ordning. Värdet på k varierar från 0 till oo. I detta fall, vid Kg - koefficient med hänsyn till basens kvalitet; I är höjden på kolets fria fall, m.

där P är lutningsvinkeln för den reflekterande ytan, grad; W + 5 ~ - klassens innehåll större än 6 mm,%.

Både stötarnas natur och yttre mekaniska belastningar som uppstår vid dropparna i trafikflödet bestäms av konstruktionsparametrarna för överföringsanordningarna och transportmedlen: fallhöjden, styvheten och lutningsvinkeln för den reflekterande ytan, matningstransportörens hastighet och lutningsvinkel och andra faktorer.

i en vinkel och till horisonten från en höjd h till en reflekterande yta, i sin tur lutande i en vinkel P. Vid kollisionspunkten mellan den reflekterande ytan och antracit kan hastigheten för dess nedbrytning sönderdelas till normal vn och tangent vr med avseende på de reflekterande ytkomponenterna. Kinetisk energi för kollision bestäms av den normala komponenten Vn, som kan bestämmas med formeln

De klassificeringar som gäller idag betraktar kol huvudsakligen som ett energibränsle, därför återspeglar de inte tillräckligt de egenskaper som är viktiga för processerna för kemisk-teknologisk bearbetning. För närvarande pågår forskning i många länder för att utveckla metoder för att entydigt bedöma lämpligheten av något kol för olika riktningar dess tekniska användning, inklusive för bearbetning till motorbränslen. I Sovjetunionen har utvecklingen av en sådan enhetlig klassificering under de senaste åren slutförts: koldagar baserade på deras genetiska och tekniska parametrar. Enligt denna klassificering uttrycks kolens petrografiska sammansättning genom innehållet i sammansmältade mikrokomponenter. Metamorfismens stadie bestäms av vitrinitreflektionsindikatorn, och graden av återhämtning uttrycks av en komplex indikator: för bruna kol - av utbytet av halvkoks tjära och för bituminösa kol - av flyktiga avkastningar och sintringskapacitet . Var och en av klassificeringsparametrarna återspeglar vissa egenskaper hos materialkompositionen och kolmolekylstrukturen.

Fram till 1989 hade varje kolbassäng sin egen klassificering, förankrad i motsvarande GOST. Grunden för dessa klassificeringar för att dela kol i kvaliteter och inom varje kvalitet i grupper var: flyktiga ämnes utbyte, plastskiktets tjocklek och egenskaperna hos den icke-flyktiga återstoden vid bestämning av utbytet av flyktiga ämnen. Sedan 1991 har Unified Classification of Bituminous Coals införts. Enligt standarden, som föreskriver nya klassificeringsparametrar, är kol uppdelade i typer beroende på värdet av vitrinitreflektionsindex, förbränningsvärme och utsläpp av flyktiga ämnen till brunt, sten och antracit.

Kevich och Yu.A. Zolotukhin försökte utveckla en metod för att förutsäga koksstyrka med hänsyn till den petrografiska sammansättningen och reflektionsindexet för vitrinit. Kolens heterogenitet i laddningen beaktades när det gäller graden av metamorfism och mikrolitotypkomposition. Indikatorn för plastskiktets tjocklek beaktades också, liksom askhalten i den förutsagda laddningen, beräknad utifrån additiviteten.

Som kan ses finns det inga märkbara skillnader i askinnehåll, totalt svavelinnehåll och sintringskapacitet inom varje laddningspar som differentieras av batterier. Utbytet av flyktiga ämnen är något lägre för laddningar avsedda för koksugnsbatteri nr 1-bis. Värdena för de komplexa indikatorerna för alla varianter motsvarar eller ligger nära de optimala medianvärdena; i detta fall kan fortfarande vissa preferenser ges till laddningarna för batteri nr 1-bis. Tabell 6 visar egenskaperna hos sintring, vilket bekräftar denna position. De petrografiska egenskaperna hos de experimentella laddningarna, inklusive medelvärdena för vitrinitreflektionsindexet och fördelningen av olika stadier av metamorfism inom vitrinitkomponenten i kulladdningar, presenteras i tabell. 7.

Laddningsalternativ Vitrinitreflektionsindex р О / "0, / О Vitrinitmetamorfismens stadie,%

petrografisk;

Metamorfismens stadie fastställs av reflektiviteten hos vitrinit. Kärnan i metoden är att mäta och jämföra de elektriska strömmar som uppstår i fotomultiplikatorröret under reflekterat ljus från de polerade ytorna på provet och referensprovet. Vitrinitreflektansindexet för bituminösa kol varierar från 0,40 till 2,59.

Kol med låg rang är kol med ett bruttovärdevärde på mindre än 24 MJ / kg och en genomsnittlig vitrinitreflektans /? „Mindre än 0,6%;

Kol av högre rang anses vara kol med ett bruttovärdevärde som är lika med eller större än 24 MJ / kg, samt med ett bruttovärdevärde på mindre än 24 MJ / kg, förutsatt att den genomsnittliga reflektansen för vitrinit är lika till eller större än 0, b%.

Genomsnittlig reflektion av vitrinit, K, "% - två siffror

De två första siffrorna i koden indikerar vitrinitens reflektivitet, motsvarande den nedre gränsen för 0,1% värdeintervall för den genomsnittliga reflektansen av vitrinit, multiplicerat med 10;

Att mäta reflektansen av vitrinit Ro% är en av de vanligaste metoderna för att bedöma graden av mognad av organiskt material i sediment. Vitrinitens reflektivitet mäts som förhållandet mellan intensiteten hos de reflekterade och infallande ljusstrålarna. Enligt de fysiska lagarna för reflektion och brytning av ljus,

Fraktionen av intensiteten, Rо, av en stråle av monokromatiskt ljus som normalt reflekteras från en plan yta av en vitrinitbit med ett brytningsindex n nedsänkt i olja med ett brytningsindex nr (eller i luft med ett index n а) är lika med:

Brytningsindexen n och n o bestäms av den integrerade temperaturhistoriken för vitrinitprovet, d.v.s. funktion T (t). Metoden bygger på tanken att vitrinit vid koalifiering ändrar sin reflektivitet från Ro = 0,25% i torvstadiet till Ro = 4,0% vid antracitstadiet (Lopatin och Emets, 1987). Det enorma faktamaterial som hittills har samlats in gör det möjligt att identifiera vissa stadier av mognad baserat på de uppmätta värdena på Ro%. I detta fall är variationer möjliga i värdena på x Ro% för OF olika typer, liksom beroende på innehållet av föroreningar i OM. Så, Ro = 0,50% motsvarar ungefär början på huvudstadiet av oljebildning för högsvavliga kerogener, medan Ro = 0,55 - 0,60% - samma steg för kerogener av typ I och II (se nedan), och Ro = 0,65 - 0,70% - för typ III -kerogener (Gibbons et al., 1983; Waples 1985). En av varianterna av den förmodade överensstämmelsen mellan Ro% -värden och huvudstadierna i OM-mognad och de beräknade värdena för temperatur-tidindex (TWI), som diskuteras nedan, kan ses i Tabell 1-7a liksom på ris. 1-7... Överensstämmelsen mellan katagenesstadierna och de Ro-värden som anges i tabellen är baserad på korrelationen mellan de beräknade temperatur-tid-indexen (TWI) och Ro% -värdena mätt i olika bassänger i världen och är ungefärligt . Det används dock mycket i litteraturen och diskuteras mer detaljerat i avsnitt 7-5-1. För att underlätta orienteringen i olika skalor av OM-katagenes visar tabellerna 1-7b också skalan för korrespondens av värden

Tabell 1-7a. Korrespondens av Ro% och TVI -värden till stadierna av OM -katagenes(Waples, 1985)

reflektansen av vitrinit% Ro till OM -mognadsstadierna antagna inom rysk petroleumgeologi.

Tabell 1-7b. Korrespondens av Ro% -värden till stadierna av OM -katagenes som accepteras i rysk petroleumgeologi(Parparova et al., 1981)

Diagenes: DG3, DG2 och DG1 ------ Ro< 0.25%

Protocatagenesis: PC1 (0,25 £ Ro £ 0,30%)

PK2 ((0,30 £ Ro £ 0,42%)

PK2 ((0,42 £ Ro £ 0,53%)

Mesocatagenesis: MK1 (0,53 £ Ro £ 0,65%)

MK2 ((0,65 £ Ro £ 0,85%)

MK3 ((0.85 £ Ro £ 1.15%)

MK4 ((1.15 £ Ro £ 1.55%)

MK5 ((1.55 £ Ro £ 2.05%)

Apokatagenes: AK1 (2,05 £ Ro £ 2,50%)

AK2 ((2,50 £ Ro £ 3,50%)

AK3 ((3,50 £ Ro £ 5,00%)

AK4 ((Ro> 5,00%)

Låt oss kort beskriva några av problemen i samband med användningen av% Ro -mätningar för att bedöma graden av OM -katagenes. De är främst förknippade med svårigheten att separera vitrinitmaceraler från OM av sedimentära bergarter på grund av deras stora mångfald. Användningen av reflektiviteten hos vitrinit för att kontrollera paleotemperaturförhållanden är i allmänhet endast möjlig på grundval av vitrinit från kolbäddar och, med mindre tillförlitlighet, vitrinit från det kontinentala (”terrestriska”) moderföretaget i leror med ett organiskt kolinnehåll högst 0,5%. Försiktighet bör dock iakttas i dessa markbundna serier, som i stenar som sandstenar, huvuddelen av OM kan återvinnas och ändras (Durand et al. 1986). Det är också nödvändigt att ta hänsyn till det faktum att reflektionseffekten under alla omständigheter för Ro> 2% också beror på trycket. Man bör också vara försiktig med att utvidga begreppet vitrinit till marina och lakustrina bergserier, eftersom partiklar vars reflektivitet mäts sällan är vitrinit från högre växter och i de flesta fall i sådana bergarter

Ris. 1-7. Korrelation av vitrinitreflektivitet, Ro%och grad av koalifiering med andra mognadsindex och med positionen för generationszonerna och sönderdelningen av olja och gas Ovan: efter (Kalkreuth och Mc Mechan, 1984), botten efter (Tissot et al. , 1987).

är bituminoider från plankton, misstas som vitrinit (Waples, 1985; Durand et al. 1986). När det gäller termofysiska egenskaper skiljer de sig från vitrinit. Ett liknande problem finns för markbaserade kambrium-ordovicier och äldre stenar. De kan inte innehålla vitrinit, eftersom högre växter inte fanns då. OM oxideras i alla rödfärgade formationer. I kalkstenar bevaras vitriniter mindre ofta och om de finns kan deras reflektivitet skilja sig från värdena för normal vitrinit av samma grad av koalisering (Buntebarth och Stegena, 1986).

Vissa fel i denna metod för att bedöma OM -katagenes kommer också att uppstå på grund av betydande spridning i de uppmätta värdena för Ro, liksom på grund av att bassängdelen alltid kommer att innehålla horisonter där separationen av vitrinit är svår eller omöjlig alls. Till exempel, vid låga mognadsnivåer, är isoleringen av vitrinitmaceraler ett stort problem, och därför är tillförlitligheten för Ro -mätningar för värden mindre än 0,3–0,4% extremt låg (Waples et al. 1992). Beroendet av reflektiviteten hos vitrinit av den ursprungliga kemiska sammansättningen av vitrinit kommer att vara signifikant (Durand et al. 1986). Detta förklarar det faktum att en stor spridning av Ro% -värden ofta observeras även inom samma bassäng (Tissot et al. 1987). För att göra fel från variationer i den kemiska sammansättningen av vitrinit utförs minsta Ro% -mätning på prover av vanlig vitrinit, isolerade genom standardprocedur från organiskt material av kontinentalt ursprung. Det rekommenderas inte att använda ekvivalenta typer av vitrinit i OM -typerna I och II när man skapar universella korrespondensskalor för Ro% -värden till graden av OM -omvandling (Tissot et al. 1987).

Och ändå, med rimlig hänsyn till de kommentarer som gjorts, är metoden för att bedöma OM -mognadens nivå och genom den kontrollera temperaturförhållandena för nedsänkning av sedimentlagren baserat på mätningar av vitrinits reflektivitet för närvarande en av de mest pålitliga och utbredda metoder för analys av olje- och gasbassänger.

7.3 Använda% Ro och andra metoder för att uppskatta maximala bergtemperaturer i bassängens nedsänkningshistorik

Ursprungligen användes reflektivitetsmätningar av vitrinit för att uppskatta de maximala temperaturerna Tmax i sviternas sughistorik. För liknande ändamål har och har ett antal metoder använts och använts i geologiska studier, såsom (Yalcin et al., 1997): 1) uppskattningar av Tmax med graden av OM -mognad (koalifieringsgrad, vitrinitreflektans; 2 ) uppskattningar baserade på mineralogiska förändringar under diagenes av lermineraler och illit kristallisation; 3) metoder baserade på analys av vätskeinneslutningar, till exempel temperaturen för flytande homonisering; 4) geotermometrar baserade på specifika kemiska reaktioner, exempelvis som kännetecknar jämvikten för stabila isotoper (Hoefs, 1987) eller jämviktstillstånden i SiO 2-Na-K-Ca-systemet (Ellis och Mahon, 1977); 5) Fizzion-track-analys (analys av fördelningen av spår från klyvning av radioaktiva element i appatite; Green et al., 1989; 1995); 6) baserat på en kombination av bestämning av radiometrisk ålder för sådana radiometriska system som K-Ar, Rb-Sr och U, som stängs när olika temperaturer(Buntebarch och Stegena, 1986). Eftersom uppskattningar av paleotemperatur fortfarande är utbredda i den geologiska litteraturen beskriver vi kort var och en av dessa metoder. Låt oss börja vår presentation med uppskattningar av de maximala temperaturerna på bergarter baserat på värdena för vitrinits reflektans.

Vi noterar genast att utvecklingen av metoder för att bedöma de maximala temperaturerna i historien om nedsänkta sedimentära formationer (T max) är förknippad med det faktum att på 70- och 80 -talen av förra seklet ansåg många forskare temperaturen som den viktigaste och i själva verket den enda faktorn i utvecklingen av OM -mognaden i sediment. I detta fall försummades tidens inflytande på OM -mognadsprocessen. Man trodde att de uppmätta (eller beräknade) värdena för reflektansen av vitrinit% R® bör återspegla bergets maximala temperaturer i deras nedsänkningshistoria. Efter dessa åsikter har olika korrelationer föreslagits mellan Tmax -värdena och vitrinitstenens reflektans i luft% Ra och i olja% Ro. I arbetena från Ammosov et al. (1980) och Kurchikov (1992) föreslås till exempel att uppskatta värdena för Tmax från de uppmätta värdena på% R a från förhållandet

10 × R а (%) = 67,2 × (7-1)

För prover av kolhaltiga mellanlager i bergarter, från förhållandet

10 × R а (%) = 67,2 × (7-2)

För sandstenar och siltstenar och enligt ekvationen

10 × R а (%) = 67,2 × (7-3)

För leror och lerstenar. I ovanstående uttryck uttrycks Tmax i ° C. Price (1983) menade också att en tid på ett och ännu fler miljoner år inte har någon märkbar effekt på OM-mognadsprocessen och föreslog på denna grund en relation liknande (7-1)-(7-3), länka T max med en reflektivitet av vitrinit i olja (% Ro):

T max (° С) = 302,97 × logg 10 Ro (%) + 187,33 (7-4)

Flera liknande förhållanden har övervägt K. Barker (Barker och Pawlevicz, 1986; Barker, 1988, 1993). Den första är (Barker och Pawlevicz, 1986):

l Ro (%) = 0,0078 × T max (° С) - 1,2 (5)

baserat på 600 T max -mätningar i 35 brunnar i olika bassänger i världen. Enligt författarna är det giltigt inom temperaturområdet 25 £ T max £ 325 ° C och reflektiviteten hos vitrinit 0,2% £ Ro £ 4,0%. K. Barker (Barker, 1988) föreslog ett förhållande som beskriver situationer med en konstant uppvärmningshastighet av stenar under nedsänkning i ett bassäng:

T max (° С) = 104 × ln Ro (%) + 148. (7-6),

och baserat på en kinetisk mognadsmodell av vitrinit (Burnham och Sweeney, 1989). M. Johnson et al. (Johnsson et al., 1993), analyserar denna formel, notera att den väl beskriver situationen med uppvärmningshastigheter V = 0,1 - 1 ° C / miljon. år, men för hastigheterna V = 10 - 100 ° C / mln. år underskattar värdena för T max i regionen Ro< 0.5% и переоценивает их при Ro >2%. I sitt senare arbete föreslog Barker (1993) en annan version av korrelationen mellan Tmax och% Ro, som inte innehåller begränsningar för bergets uppvärmningshastighet:

T max (° С) = [ln (Ro (%) / 0,356)] / 0,00753 (7-7)

Således föreslås i litteraturen ganska många korrelationsförhållanden T max -% Ro. På ris. 2-7 de jämförs med varandra enligt resultaten från T max -uppskattningar för värden på 0,4% £ Ro £ 4,0%.

Ris. 2-7. Förhållanden som kopplar samman den maximala temperaturen T max i bergets nedsänkta historia med de uppmätta värdena för vitrinitens reflektans i olja% Ro, enligt olika litterära källor: 1 (för kol), 2 (för sandstenar och siltstenar) , 3 (för leror och lerstenar) - (Ammosov et al., 1980; Kurchikov, 1992); 4 - (Pris, 1983); 5 - (Barker och Pawlevicz, 1986); 6 - (Barker och Pawlevicz, 1986); 7 - (Barker, 1993); 8 - enligt temperaturen för homogenisering av vätskeinneslutningar (Tobin och Claxton, 2000).

Denna siffra visar en signifikant spridning av T max -värdena som motsvarar fasta Ro -värden, som når 60 - 100 ° С för löptiden Ro ³ 0,7%. Denna spridning indikerar entydigt att temperaturvärdet (även det högsta) ensamt inte kan bestämma mognad för OM i bergarter, och att temperaturhållningstiden spelar en betydande roll för mognad av OM. Det är möjligt att i vissa Ro -intervaller och under speciella sedimentationsförhållanden (t.ex. sådana som säkerställer en konstant uppvärmningshastighet av bergarter) beskriver några av ovanstående förhållanden situationen väl, men som studier visar (se nedan), samma % Ro -värden kan uppnås till exempel vid lägre temperaturer men med längre berghållstider (se nedan). Av denna anledning finns det alltid ett bassäng och en bildning med lämplig mognad och temperaturintervall, för vilka uppskattningar baserade på förhållanden (7-1)-(7-7) kommer att leda till märkbara fel. Denna omständighet ledde till att populariteten hos de utskrivna förhållandena har märkbart minskat under de senaste 10-15 åren.

En annan vanlig metod för att bedöma paleotemperaturerna för bergarter i bassänger är bestämning av Tmax genom att analysera sammansättningen av vätskor som fångas upp av matrisen av bergarter under diagenes. Metoden kan tillämpas om följande villkor är uppfyllda (Burruss 1989): 1) införandet är en enfasvätska, 2) volymen av denna vätska ändras inte efter att den fångats upp av berget, 3) dess sammansättning också förblev oförändrad, 4) effekten av tryck på vätskans sammansättning är känd i förväg, 5) tiden och mekanismen för att fånga vätskan är också känd. Dessa villkor tyder på att viss försiktighet krävs vid tillämpningen av metoden (Burruss 1989). Först krävs detaljerade petrografiska studier för att fastställa den relativa tidpunkten för bildandet av vätskeinkluderingen. För det andra krävs en grundlig analys av områdets tektoniska utveckling och bassängens nedsänkning för att beskriva värdbergarnas historia. En analys av fasbeteendet och den kemiska sammansättningen av den instängda vätskan krävs också. Men även efter det återstår två viktiga problem - ett förknippat med antagandet att vätskans kemiska sammansättning förblir oförändrad efter att den har fångats upp av bergmatrisen (det finns övertygande bevis för att så inte alltid är fallet), och den andra , associerad med bestämning av storleken och typen av tryck som fanns under perioden vätskelagring - vare sig litostatisk eller hydrostatisk (Burruss 1989). Om alla dessa problem löses, bestäms bergets temperatur vid infångningstidpunkten av vätskan med motsvarande P-T-diagram över jämvikten för vätskan och fasta faser av den undersökta substansen. Vid utvecklingen av denna metod föreslog Tobin och Claxton (2000) att använda korrelationen mellan homogeniseringstemperaturen för vätskeinkluderingar T hom och reflektansen av vitrinit Ro% (Fig. 2-7):

Ro% = 1,9532 ´ log T hom - 2,9428 (7-8)

De fann att när man använder en ”idealisk” mätningsserie är förhållandet (7-8) nöjt med en korrelationskoefficient på 0,973 och en datavarians på mindre än 0,12% Ro. Om hela intervallet av världsdata används har förhållandet följande form:

Ro = 2.1113 ´ log T hom - 3.2640 (7-9)

kommer att utföras med en korrelationskoefficient på 0,81 och en maximal datavarians på mindre än 0,32% Ro (Tobin och Claxton, 2000). Homogeniseringstemperaturen T hom används ofta som en uppskattning av den maximala bergtemperaturen Tmax under dess nedsänkning i bassängen. Fig. 2-7 visar att kurvan konstruerad enligt formeln (7-9) skiljer sig markant från uppskattningarna av Tmax enligt formlerna (7-1)-(7-7) och korsar de återstående linjerna i fig. 2-7. Hon sänker klart temperaturerna för Ro< 1.5% и даёт нереально высокие значения при Ro >2% (Th = 540, 930 och 1600 ° C för Ro = 2,5, 3 respektive 3,5%).

Figur 3-7 Förändring i d 13 C isotopförhållande med djup för ett gasfält i Anadarko Basin (USA; Price, 1995).

I ett antal arbeten (Rooney et al., 1995; Price, 1995, etc.), för att uppskatta temperaturen på kolvätegenerering, föreslås att man använder förändringen i den isotopiska sammansättningen av kol under OM -katagenes (Figur 3-7)... Resultat av experiment med generering av gaser av OM typ II (moderberg från delaware- och Val Verde -bassängerna i västra Texas) vid en konstant uppvärmningshastighet på 1 ° C / min (vänster ris. 4-7; Rooney et al., 1995) visar en märkbar förändring i gasernas isotopkomposition

Ris. 4-7. Gasgenereringstemperatur och d 13 C isotopförhållande för metan (d 13 C 1), etan (d 13 C 2) och propan (d 13 C 3) genererat av typ II -kerogen från Delaware- och Val Verde -bassängerna i västra Texas vid uppvärmningshastighet för bergarter 1 ° C / min (vänster figur, enligt Rooney et al., 1995) och isotopförhållande d 13 C för metan som genereras vid olika temperaturer under hydroidpyrolys av bergprover med olika typer av organiskt material (höger figur, efter Price, 1995).

med temperatur och bekräftar därmed den grundläggande möjligheten att använda detta beroende för att uppskatta genereringstemperaturen för gaser av denna typ av OM. Detsamma framgår av resultaten av hydroidpyrolys av bergprover med olika typer av organiskt material, som visas i figuren till vänster. 4-7. De visar också tydligt förändringen i isotopförhållandet d 13 C för metan som genereras vid olika temperaturer (Price, 1995). Dessa experiment indikerar emellertid också en extremt hög känslighet för förändringar i d 13 C för variationer i sammansättning och typ av OM, på grund av vilken tillämpning av metoden endast är möjlig efter en detaljerad analys av sammansättningen av OM och erhållande av motsvarande beroende specifikt för typen av ämne som analyseras. En stor spridning i värdena på d 13 C med djup, visat i fig. 3-7 för en typisk sektion av ett sedimentärt bassäng orsakas huvudsakligen av variationer i sammansättning och typ av organiskt material i klipporna i sektionens makro- och mikroskikt. Denna spridning begränsar starkt tillförlitligheten hos temperaturuppskattningarna baserat på isotopförhållanden i gaser i riktiga sedimentära sektioner.

Processen att omvandla smektit till illit i lermineraler används också ibland för att kontrollera paleotemperaturförhållanden i bassänger. Men, ris. 5-7 visar att temperaturområdena som är typiska för processen är ganska breda. Denna variation i temperatur är inte förvånande, eftersom laboratoriestudier visar att omvandlingen av smektit till illit drivs av en kinetisk reaktion av sjätte ordningen (Pytte och Reynolds, 1989) och därför påverkar tiden hastigheten på dessa övergångar tillsammans med temperaturen. Dessa reaktioner kommer att behandlas mer detaljerat i det sista avsnittet i detta kapitel, men här noterar vi att rimliga uppskattningar av temperaturen vid övergången av smektit till illit endast är möjliga för den isotermiska versionen av omvandlingen av mineraler, men även då är fel i metoden kommer att märkas.

Figur 5-7 Omvandling av lermineraler baserat på analys av prover från 10 brunnar i Nordsjön (Dypvik, 1983). Processen för försvinnande av smektit och illitskikt med olika nivåer i blandade smektit-illit-lermineraler är knutna till värdena för temperaturer och reflektivitet av vitrinit.

Av alla mikrokomponenter i organiskt material är vitrinit det bästa ur indikativ synvinkel i studien av graden av katagenetisk transformation. Faktum är att för tillförlitlig diagnostik krävs en mikrokomponent som måste ha en regelbunden förändring av egenskaperna under transformationsprocessen, samtidigt som den måste vara utbredd i OM. Vitrinite uppfyller alla ovanstående krav, till skillnad från andra mikrokomponenter av kol och DOM. Som antingen smälter samman med den totala organiska massan av kol redan vid katagenesens mittstadier (leupinit), eller reagerar svagt och ojämnt på förändringar i miljöparametrar (fusinit). Och endast vitrinit förändrar dess egenskaper naturligt gradvis och är mycket lätt att diagnostisera.

Det är på grundval av reflektiviteten hos vitrinit att de flesta skalorna för att bestämma graden av katagenes är byggda. Förutom det används andra mikrokomponenter av DOM, men i mindre utsträckning. Metoden är baserad på regelbundenheten av ökningen av ljusstyrka vid katagenesprocessen. Detta kan lätt ses visuellt om vi överväger förändringen i kolens lyster i processen med deras förändring. Inga speciella instrument krävs för att märka att lyster av antracit, till exempel, är mycket högre än brunkol. Reflektivitet är nära besläktat med ett ämnes inre struktur, nämligen graden av packning av partiklar i ett ämne. Det beror bara på det. Naturligtvis utförs studien av graden av katagenes när det gäller reflektivitet med hjälp av specialutrustning, till exempel består installationen av en POS-I-enhet av ett polariserande mikroskop, ett optiskt fäste, ett fotomultiplikatorrör (PMT) och en Inspelningsutrustning. Studien jämför fotoströmmarna som orsakas av ljuset som reflekteras från ytan av provet och referensen.

Så, vitrinit, eller snarare dess reflektivitet, togs som en standard under forskning. Det mäts med hjälp av olika fotometrar och standarder i luft och nedsänkningsmedium vid strikt vinkelrätt ljusinsläpp på en välpolerad provyta. Mätningar utförs endast i ett smalt våglängdsområde: från 525 till 552 nm. Denna begränsning beror på enhetens tekniska egenskaper. En våglängd på 546,1 nm tas som standard, men små fluktuationer kring detta värde har praktiskt taget ingen märkbar effekt på mätvärdet. Provet fixeras på mikroskopsteget och stoppas så att dess yta är vinkelrätt mot axeln för den optiska infästningen. Som nämnts ovan mäter vi intensiteten hos det reflekterade ljuset växelvis från provet och referensen med hjälp av en fotomultiplikator. Per definition är reflektivitet förmågan att reflektera en del av ljuset som infaller på en yta. Översatt till numeriska termer är detta förhållandet mellan reflekterat ljus och infallande ljus.

Vad kan skrivas som:

Där I1 är intensiteten hos det reflekterade ljuset och I2 är intensiteten hos det infallande ljuset. I praktiken används formeln vid mätningar

Här är R den önskade reflektansen, d är instrumentavläsningarna vid mätning av testsubstansen och R1, respektive, är standardreflektansen och d1 är instrumentavläsningarna när standarden mäts. Om du ställer in den mottagande enheten på noll för referensen, förenklas formeln till R = d.

Förutom vitrinit används även andra OM -mikrokomponenter för mätningar. Några av dem har egenskapen reflektivitetsanisotropi. Tre mätparametrar används vanligen: Rmax Rmin Rcp. En ökning av vitrinitanisotropi under katagenes är huvudsakligen associerad med processen för gradvis ordning av aromatiska humiska miceller i samband med en ökning av trycket med ökande nedsänkningsdjup. Mätningar för ett anisotropiskt prov skiljer sig inte konceptuellt från mätningen av ett homogent prov, men flera mätningar görs. I detta fall roterar mikroskopsteget 360? med 90 ° intervall. Två lägen med den högsta reflektansen och två med den lägsta reflektansen detekteras alltid. Vinkeln mellan var och en av dem är 180 °. Mätningar görs för flera bergstycken och genomsnittet beräknas senare. Som det aritmetiska medelvärdet av medelvärdet för högsta och lägsta mätning:

Du kan omedelbart bestämma genomsnittet genom att välja en rotationsvinkel på 45? från max- eller minimivärdet, men denna mätning är endast korrekt när man studerar ett svagt konverterat OM.

När man forskar, uppstår flera teknikrelaterade problem. Om vi ​​till exempel har en sten med ett lågt totalt organiskt materialinnehåll, blir det nödvändigt att bearbeta provet speciellt och omvandla det till form av koncentrerade polerade sektioner-briketter. Men i processen att erhålla koncentrat genomgår det ursprungliga organiska ämnet kemisk behandling, vilket inte kan påverka ämnets optiska egenskaper. Dessutom går information om strukturen av bergets organiska material förlorad. Mätningar kan förvrängas av det faktum att tekniken för beredningsprocessen inte är standardiserad och provets beredskap vanligtvis bestäms visuellt. Problemet är också fysikaliska egenskaper bergarter, till exempel stark mineralisering eller sprödhet av kol, i detta fall är det nödvändigt att studera reflektiviteten på den yta som erhölls. Genom att välja rätt plats har de omgivande defekterna liten eller ingen effekt på mätningarna. Men de principiellt kvantitativa värdena för fel påverkar praktiskt taget inte bestämningen av katagenesstadiet.

Prover studeras, vanligtvis under normala luftförhållanden, det är enkelt och snabbt. Men om en detaljerad studie krävs under hög förstoring används nedsänkningsmedier, vanligtvis cederträ. Båda mätningarna är korrekta och var och en av dem används, men var och en i sitt eget specifika fall. Fördelarna med mätningar i ett nedsänkningsmedium är att de tillåter studier av partiklar med en liten dimension, dessutom ökar skärpan, vilket gör det möjligt att diagnostisera graden av katagenes mer detaljerat.

En ytterligare svårighet i forskningen är diagnosen av mikrokomponenter i OM, eftersom de vanligtvis detekteras i överfört ljus. Medan reflektiviteten uppenbarligen reflekteras. Det är därför. Vanligtvis kombineras två metoder i forskningsprocessen. Det vill säga överfört och reflekterat ljus används växelvis för att studera samma DOM -fragment. För detta används vanligtvis dubbelsidiga polerade sektioner. I dem, efter att ha sett och bestämt mikrokomponenten i det överförda ljuset, ändras belysningen och mätningar görs i det reflekterade ljuset.

Vitrinit kan användas inte bara för att bestämma graden av omvandling av organiskt material, utan också för att bestämma dess relation till berget. I syngenetisk vitrinit är fragmentens form vanligtvis långsträckta, partiklarna är placerade parallellt med ströplanen och har vanligtvis en cellulär struktur. Om vi ​​har att göra med vitrinitpartiklar med en rundad, avrundad form, så är det troligtvis en återavsatt substans.